Recursos de investigación

Para acelerar la investigación y el descubrimiento y desarrollo de fármacos para la fibrosis quística (FQ) es fundamental disponer de modelos celulares, animales y de la enfermedad sólidos y validados.. Falta de sistemas modelo para apoyar la investigación de mutaciones CFTR ha servido anteriormente como barrera para el progreso. En Emily's Entourage, estamos profundamente comprometidos con la inversión y el desarrollo de los sistemas modelo y los recursos de investigación más rigurosamente probados para las personas con FQ que no se benefician de los moduladores CFTR actuales. 

Entre los recursos a disposición de la comunidad investigadora figuran:

Construcciones de ADN complementarias

Construcciones de ADNc que expresan CFTR mutado (W1282X-CFTR) y truncado producido por la mutación W1282X-CFTR (CFTR₁₂₈₁). Los constructos se generaron en pcDNA3.1/Zeo(+), y pueden subclonarse fácilmente en vectores alternativos. Para más información formulario.. La generación de estas construcciones de ADNc fue apoyada por Emily's Entourage. 

Constructos virales

John Lueck, doctor del Centro Médico de la Universidad de Rochester, ha generado construcciones lentivirales y adenovirales que codifican ARN de transferencia con ingeniería anticodón (ACE-ARNt) que reconocen y suprimen eficazmente los genotipos de codones de terminación prematura (PTC) de CFTR, incluido W1282X. Más información formulario.. La generación de estas construcciones virales contó con el apoyo de Emily's Entourage.

Modelos de celdas

Células epiteliales de las vías respiratorias

• Finn J. Hawkins, MBBCh, Universidad de Boston, generó un panel de células epiteliales de las vías respiratorias utilizando células madre pluripotentes inducidas (iPSCs) de pwCF con W1282X-CFTR (y otras mutaciones CFTR). Estas células pueden mantenerse en cultivo, diferenciarse en epitelio pseudoestratificado en interfase líquido-aire para evaluaciones electrofisiológicas, y criopreservarse. Se trata de una valiosa herramienta de investigación para estudiar la FQ y acelerar el desarrollo terapéutico para la FQ causada por variantes raras. El desarrollo de este panel de células contó con el apoyo de Emily's Entourage. Para conocer la disponibilidad de genotipos específicos e iniciar solicitudes de MTA, no dude en ponerse en contacto con el Dr. Finn J. Hawkins.

Células HEK293T de ingeniería 

• Las células de riñón embrionario humano (HEK) 293T que expresan W1282X-CFTR marcado con 3HA (y otras mutaciones CFTR) están disponibles a través de Marianne Carlon, PhD, KU Leuven. Estas líneas celulares son una gran herramienta de investigación para el cribado rápido de muchas estrategias de corrección CFTR (por ejemplo, compuestos, adición de genes y edición de genes), son fácilmente transfectadas, y la etiqueta 3HA permite una lectura directa a nivel de proteína (por ejemplo, por Western Blot e inmunocitoquímica para la localización de la membrana plasmática). La generación de estas líneas celulares de ingeniería se ha publicado en formato de acceso abierto (Bulcaen et al., Cell Reports Medicine, 2024) y contó con el apoyo de Emily's Entourage. Para conocer la disponibilidad de genotipos específicos e iniciar solicitudes de MTA, no dude en ponerse en contacto con la Dra. Marianne Carlon.
• Marianne Carlon, PhD, KU Leuven, ha adaptado un reportero de edición primario previamente descrito (PEAR; Simon et al., eLife, 2022) para que sea compatible con la producción de partículas lentivirales. Se generó una línea celular estable (línea celular PEAR) que codifica el reportero GFP con el sitio de empalme interrumpido, en combinación con la expresión constitutiva de miRFP. Tras la edición exitosa de la base de cebado o adenina, la línea celular PEAR-HEK293T se vuelve GFP-positiva, permitiendo la investigación de nuevas arquitecturas PE- o ABE-VLP, la optimización de protocolos de producción y la titulación funcional de nuevas preparaciones. La generación de esta línea celular estable contó con el apoyo de Emily's Entourage. Para iniciar solicitudes de MTA, no dude en ponerse en contacto con la Dra. Marianne Carlon.

Modelos de células epiteliales tiroideas de rata

• Modelos de células de tiroides de rata Fischer (FRT) que expresan W1282X-CFTR y CFTR₁₂₈₁ (con el reportero sensible al haluro EYFP-H148Q/I152L/F46L). Estos modelos celulares se prestan a la evaluación fluorescente y electrofisiológica de la actividad CFTR. Más información formulario.. Emily's Entourage apoyó la generación de estos modelos celulares.

Modelos de células epiteliales de las vías respiratorias inmortalizadas  

• CFBE41o inmortalizado: células epiteliales de las vías respiratorias que expresan W1282X-CFTR o CFTR₁₂₈₁ Gergerly Lukacs, MD, PhD, McGill University, ha generado etiquetas de epítopo HA triplete diseñadas para facilitar la bioquímica y la presentación de la superficie celular. 

Modelos de células epiteliales de las vías respiratorias editadas genéticamente

• El Laboratorio de Terapéutica de la Fundación de Fibrosis Quística ha generado células epiteliales bronquiales humanas que expresan W1282X-CFTR (y mutaciones adicionales de CFTR), editadas con genes inmortalizados 16HBE14o, y están disponibles formulario..
  
• Las células 16HBE14o- editadas genéticamente que expresan W1282X-CFTR (y otras mutaciones CFTR) generadas por el Laboratorio CFFT han sido diseñadas por Marianne Carlon, PhD, KU Leuven para expresar la proteína de fluorescencia amarilla (YFP) sensible al haluro (HS). La expresión estable de HS-YFP en estas células permite monitorizar la corrección funcional de CFTR. Puede ser una valiosa herramienta de investigación para estudiar la eficacia de la edición génica u otras estrategias de corrección. La ingeniería de estos modelos celulares contó con el apoyo de Emily's Entourage. Para conocer la disponibilidad de genotipos específicos e iniciar solicitudes de MTA, no dude en ponerse en contacto con la Dra. Marianne Carlon.

Modelos de células epiteliales de las vías respiratorias con crecimiento mejorado

• Las células epiteliales nasales homocigóticas W1282X-CFTR homocigotas casi nativas, que expresan un protooncogén (Bmi-1) y la subunidad catalítica de telomerasa (hTERT) están disponibles en Scott Randell, PhD, Universidad de Carolina del Norte, Chapel Hill. Más información está disponible formulario.. Emily's Entourage apoyó la generación de estos modelos celulares. 

Células epiteliales de las vías respiratorias primarias humanas y organoides intestinales

• Las células primarias nasales, pulmonares e intestinales con dos mutaciones sin sentido (incluidas las células homocigotas W1282X / W1282X) están disponibles en la colección de células RARE de CFF en el laboratorio de Cystic Fibrosis Foundation Therapeutics (CFFT). Las celdas se distribuirán en función de la disponibilidad y la evaluación de un plan de investigación breve (~ media página) que se evaluará por mérito científico. Para conocer la disponibilidad de genotipos específicos, comuníquese con Jessica Stach. Las solicitudes de MTA se pueden iniciar a través del CFFT Lab formulario..

Células epiteliales nasales primarias humanas y modelos de células madre

• Un biobanco de células epiteliales nasales y células madre pluripotentes inducidas (iPSC) aisladas de personas que viven con FQ, incluidas aquellas homocigotas o heterocigotas para las mutaciones W1282X y / o G542X, está disponible en el Programa CF Canada-SickKids in Individual Therapy (CFIT). Ciertas iPSC se han editado con CrispR para generar controles isogénicos.

Organoides rectales

• Los organoides rectales derivados de sujetos homocigotos W1282X-CFTR se mantienen y están disponibles en Tecnología organoide Hubrecht y el Laboratorio de Terapéutica de la Fundación de Fibrosis Quística.
• Jeffrey M. Beekman, PhD, UMC Utrecht, ha desarrollado organoides intestinales derivados de pacientes (PDIOS) que expresan ACE-tRNAs de forma estable mediante transducción lentiviral. El desarrollo de estas líneas celulares beneficiará a experimentos específicos como qPCRs, Western-Blots y ensayos relacionados con la toxicidad. Más información formulario.. Emily's Entourage apoyó la generación de ACE-tRNAs estables que expresan PDIOS.

Modelo de células madre

• Las células madre pluripotentes inducidas homocigotas para la mutación W1282X-CFTR están disponibles en el Diamond Lab, Universidad de Pensilvania. 

Algoritmos basados en el aprendizaje automático

• Marianne Carlon, doctora de la Universidad Católica de Lovaina, ha desarrollado un algoritmo basado en el aprendizaje automático denominado DETECTOR para el análisis de organoides de FC. formulario. (Bulcaen et al., Cell Reports Medicine, 2024). DETECTOR es una herramienta para la comprobación y el análisis rápidos de enfoques terapéuticos de edición génica en organoides intestinales. A pesar de haber sido desarrollada explícitamente para el trabajo de edición génica en organoides, esta herramienta puede aplicarse fácilmente a la adición génica o a cualquier otra estrategia que conduzca a la corrección funcional de CFTR. La generación de esta herramienta para organoides contó con el apoyo de Emily's Entourage y está disponible gratuitamente a través de GitHub.

Modelos murinos

• Los modelos murinos para investigar la patología de la fibrosis quística (FQ), incluidos los modelos de FQ causada por mutaciones sin sentido, están disponibles en Craig Hodges, PhD, en el Núcleo del modelo de ratón con fibrosis quística de la Universidad Case Western Reserve.

Nanopartículas

Nanopartículas lipídicas

• El laboratorio del doctor Debadyuti (Rana) Ghosh, de la Universidad de Texas en Austin, ha desarrollado nuevas nanopartículas lipídicas que encapsulan ARN (ARNm y ARNsg). La generación de esta formulación contó con el apoyo de Emily's Entourage, y su composición y métodos de formulación están a disposición de otros grupos de investigación para suministrar carga terapéutica de ARN. Para iniciar solicitudes de MTA, no dude en ponerse en contacto con el Dr. Ghosh.
  

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