Publicações de investigação

A Emily's Entourage apoiou a investigação que resultou nas seguintes publicações.

JORNAL DA FIBROSE CÍSTICA

October 2024

A W1282X cystic fibrosis mouse allows the study of pharmacological and gene-editing therapeutics to restore CFTR function

AUTORES
Margaret Michicich, Zachary Traylor, Caitlan McCoy, Dana M. Valerio, Alma Wilson, Molly Schneider, Sakeena Davis, Amanda Barabas, Rachel J. Mann, David F. LePage, Weihong Jiang, Mitchell L. Drumm, Thomas J. Kelley, Ronald A. Conlon, Craig A. Hodges

RESUMO
This study introduces the first W1282X-specific mouse model of cystic fibrosis under endogenous regulatory control, demonstrating similar disease manifestations to other CF mouse models but revealing substantially different responses to therapeutic agents compared to the G542X model, underscoring the need for mutation-specific strategies and advancing the case for precision medicine in treating nonsense mutation-related CF.

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JORNAL RESPIRATÓRIO EUROPEU

setembro de 2024

Tratamento sinérgico guiado por organoides de mutações CFTR de função mínima com moduladores CFTR, roflumilast e sinvastatina: uma abordagem personalizada

AUTORES
Sacha Spelier, Karin de Winter-de Groot, Natascha Keijzer-Nieuwenhuijze, Yves Liem, Kors van der Ent, Jeffrey Beekman, Kieke S Kamphuis

RESUMO
Este estudo descreve a forma como a investigação pré-clínica orientou um regime de tratamento clínico personalizado bem sucedido numa pessoa com CFTR de função mínima, com base num regime de tratamento sinérgico constituído por moduladores de CFTR, sinvastatina e roflumilast.

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RELATÓRIOS CELULARES MEDICINA

maio de 2024

A edição primária corrige funcionalmente a fibrose cística causadora de mutações CFTR em organóides humanos e células epiteliais das vias respiratórias

AUTORES
Mattijs Bulcaen, Phe'line Kortleven, Ronald B. Liu, Isabelle Sermet-Gaudelus, Anna Cereseto, Marianne S. Carlon

RESUMO
A edição primária é uma tecnologia de edição do genoma recente, derivada do CRISPR, capaz de introduzir substituições, inserções e deleções precisas de nucleótidos. Aqui, apresentamos abordagens de edição primária para corrigir L227R- e N1303K-CFTR, duas mutações que causam fibrose cística e não são elegíveis para as actuais terapias moduladoras aprovadas pelo mercado. Mostramos que, após a correção do ADN do gene CFTR, a glicosilação complexa, a localização e, mais importante, a função da proteína CFTR são restauradas nas linhas celulares HEK293T e 16HBE. Estes resultados foram posteriormente validados em organóides rectais derivados de doentes e em células epiteliais nasais humanas. Através da análise de sítios fora do alvo previstos e identificados experimentalmente em células estaminais primárias, confirmamos relatórios anteriores sobre a elevada especificidade do editor principal (PE) e o seu potencial para uma terapia de edição genética curativa da FC. Para facilitar o rastreio futuro de estratégias genéticas num modelo translacional de FC, foi desenvolvido um algoritmo de aprendizagem automática para a quantificação dinâmica da função CFTR em organóides (DETECTOR: ''detection of targeted editing of CFTR in organoids'').

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COMUNICAÇÕES SOBRE A NATUREZA 

julho de 2022

Uma plataforma multimodal de iPSC para o ensaio de medicamentos contra a fibrose cística 

AUTORES
Andrew Berical, Rhianna E. Lee, Junjie Lu, Mary Lou Beermann, Jake A. Le Suer, Aditya Mithal, Dylan Thomas, Nicole Ranallo, Megan Peasley, Alex Stuffer, Katherine Bukis, Rebecca Seymour, Jan Harrington, Kevin Coote, Hillary Valley, Killian Hurley, Paul McNally, Gustavo Mostoslavsky, John Mahoney, Scott H. Randell e Finn J. Hawkins

RESUMO
Um subconjunto de indivíduos com fibrose quística não responde aos moduladores de CFTR atualmente disponíveis e existe uma necessidade urgente de desenvolver novas estratégias terapêuticas. Neste estudo, geramos um painel de células epiteliais das vias respiratórias utilizando células estaminais pluripotentes induzidas de indivíduos com variantes comuns ou raras da CFTR representativas de três classes distintas de disfunção da CFTR. Para medir a função CFTR, adaptamos dois ensaios in vitro estabelecidos para utilização em células das vias respiratórias derivadas de células estaminais pluripotentes induzidas. Tanto num ensaio de esferóides 3-D que utiliza o inchaço induzido pela forskolina como em culturas planas compostas por células epiteliais das vias respiratórias mucociliares polarizadas, detectamos diferenças específicas do genótipo na função de base da CFTR e na resposta aos moduladores da CFTR. Estes resultados demonstram o potencial da plataforma de células estaminais pluripotentes induzidas humanas como ferramenta de investigação para estudar a FC e, em particular, acelerar o desenvolvimento terapêutico da FC causada por variantes raras.

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TERAPIA MOLECULAR: ÁCIDOS NUCLEICOS

junho de 2022

Supressão eficaz das mutações sem sentido endógenas da CFTR utilizando RNAs de transferência com engenharia anticódica  

AUTORES
Wooree Ko, Joseph J. Porter, Matthew T. Sipple, Katherine M. Edwards, John D. Lueck

RESUMO
Os tRNAs supressores foram há muito identificados como uma possível terapêutica para doenças associadas ao nonsense; no entanto, a sua capacidade de inibir o decaimento do mRNA mediado pelo nonsense (NMD) e apoiar a tradução significativa de proteínas a partir de transcritos endógenos não foi determinada em células de mamíferos. Aqui, nós investigamos a capacidade de anticódons editados (ACE) -tRNAs para suprimir a fibrose cística (FC) causando PTCs no gene regulador transmembrana da fibrose cística (CFTR) em células epiteliais brônquicas humanas imortalizadas com edição de genes (16HBEge). Este estudo estabelece a abordagem ACE-tRNA como uma potencial terapêutica autónoma para doenças associadas ao nonsense devido à sua capacidade de recuperar a expressão do mRNA e da proteína completa de genes endógenos contendo PTC.

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PNEUMOLOGIA PEDIÁTRICA

fevereiro de 2022

Um inquérito: Compreender a saúde e as perspectivas das pessoas com FC que não estão a beneficiar dos moduladores CFTR

AUTORES
Emily Kramer-Golinkoff MBE, Amanda Camacho MSW, Liza Kramer MSW, Jennifer L. Taylor-Cousar MD, MSCS, ATSF

RESUMO

Entre 10 de junho e 1 de julho de 2021, a Emily's Entourage distribuiu um inquérito anónimo com 38 perguntas dirigido a pessoas com fibrose cística que não beneficiam de moduladores aprovados, através das redes sociais e de correio eletrónico, a pessoas com FC e a grupos de defesa da FC dentro e fora dos Estados Unidos, relativamente ao estado de saúde, ao impacto da FC, às necessidades não satisfeitas e ao interesse da investigação clínica. Responderam ao inquérito 431 pessoas com FC dos cinco continentes. Os resultados do inquérito mostraram que as pessoas com FC que não são elegíveis, que são intolerantes ou que não têm acesso a moduladores têm um elevado fardo de doença com impacto na sua saúde física e mental. Embora a maioria esteja feliz por aqueles que estão a beneficiar dos moduladores, estão ansiosos pela oportunidade de experimentar melhorias semelhantes para si próprios e estão dispostos a participar em ensaios clínicos de novas terapêuticas.

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ACTAS DA ACADEMIA NACIONAL DE CIÊNCIAS (PNAS) DOS ESTADOS UNIDOS DA AMÉRICA

janeiro de 2022

Oligonucleótidos anti-sentido de exon-skipping para a terapia da fibrose quística 

AUTORES
Young Jin Kim, Nicole Sivetz, Jessica Layne, Dillon M. Voss, Lucia Yang, Qian Zhang, Adrian R. Krainer

RESUMO
O decaimento do RNA mensageiro (mRNA) mediado por nonsense (NMD) degrada o mRNA CFTR-W1282X, levando a baixos níveis de proteína CFTR funcional. Os autores do estudo desenvolveram um cocktail de dois oligonucleótidos antisense (ASOs) que promove o salto do exão 23 do mRNA CFTR-W1282X. O mRNA resultante é resistente à NMD e preserva o quadro de leitura. A sua tradução produz a proteína CFTR-Δex23 que melhora a atividade da CFTR nas células epiteliais brônquicas humanas. Os resultados preparam o terreno para o desenvolvimento de uma terapia ASO para a FC causada pela mutação W1282X. 

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JORNAL DA FIBROSE CÍSTICA

dezembro de 2020

A anfotericina B induz respostas de tensão epitelial em pessoas com fibrose quística 

AUTORES
Rajeev S. Chorghade, Bo Ram Kim, Janice L. Launspach, Philip H. Karp, Michael J. Welsh, Martin D. Burke

RESUMO
Marty Burke e colegas relatam a progressão do seu trabalho pioneiro para reorientar um medicamento existente - a anfotericina B (AmB) - como uma terapia agnóstica da mutação para a FC. Estudos anteriores em modelos celulares e animais demonstraram que a AmB imita eficazmente as funções-chave do canal iónico CFTR. Neste estudo, a capacidade da AmB para alterar a diferença de potencial nasal (NPD) - um biomarcador clínico utilizado para avaliar a eficácia de potenciais terapias para a FC - em pessoas com FC. Em oito indivíduos com FC que não utilizam moduladores, o AmB mediou alterações da NPD consistentes com a recapitulação da atividade do CFTR pelo AmB e semelhantes ao efeito do ivacaftor em indivíduos com FC com a mutação G551D-CFTR. 

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PNEUMOLOGIA PEDIÁTRICA

abril de 2020

Terapia combinada de atalureno/ivacaftor: Dois ensaios N de 1 em doentes com fibrose quística com mutações nonsense

AUTORES
Jacelyn E. Peabody Alavanca, Venkateshwar Mutyam, Heather Y. Hathorne, Ning Peng, Jyoti Sharma, Lloyd J. Edwards, Steven M. Rowe

RESUMO
Estudo clínico que testou a hipótese de que o ivacaftor em combinação com o fármaco de leitura ataluren poderia ser benéfico para indivíduos com FC com mutações nonsense. Não foi observado qualquer benefício significativo em dois indivíduos, com ivacaftor ou ivacaftor e ataluren; no entanto, foram observados alguns benefícios de significado desconhecido, incluindo pequenos aumentos na função pulmonar e no índice de massa corporal.

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JORNAL DA FIBROSE CÍSTICA

dezembro de 2019

Recuperação funcional de c.3846G>A (W1282X) em culturas nasais derivadas de doentes conseguida através da inibição do decaimento mediado por nonsense e de moduladores de proteínas com mecanismos de ação complementares

AUTORES
Onofrio Laselva, Paul D.W. Eckford, Claire Bartlett, Hong Ouyang, Tarini N.A. Gundawardena, Tanja Gonska, Theo J. Moraes, Christin E. Bear

RESUMO
Estudos de prova de conceito que demonstram a reparação farmacológica da função CFTR em células epiteliais nasais derivadas de indivíduos com FC com a mutação W1282X-CFTR. Foi observada uma restauração robusta da atividade da CFTR com moduladores da CFTR em combinação com um inibidor da degradação mediada pelo não-sentido (NMD), um processo que reconhece e destrói as transcrições que contêm mutações sem sentido ("mutações X").

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RELATÓRIOS CIENTÍFICOS

novembro de 2019

Terapia "co-potenciadora" de potência nanomolar para a fibrose quística causada por um subconjunto definido de mutantes CFTR de função mínima

AUTORES
Puay-wah Phuan, Joseph-Anthony Tan, Amber A. Rivera, Lorna Zlock, Dennis W. Nielson, Walter E. Finkbeiner, Peter M. Haggie, Alan S. Verkman

RESUMO
O rastreio de elevado rendimento é utilizado para identificar quatro classes adicionais de co-potenciadores, moduladores CFTR que funcionam em conjunto com potenciadores existentes, como o Ivacaftor, para ativar várias mutações CFTR raras, incluindo CFTR1281 (o produto proteico gerado pela mutação W1282X) e N1303K-CFTR. Estes estudos representam a progressão contínua de um novo paradigma de modulador que poderia ter utilidade terapêutica para várias mutações raras do CFTR sem terapia atualmente disponível.

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NATUREZA

março de 2019

Os canais iónicos de pequenas moléculas aumentam as defesas do hospedeiro nos epitélios das vias respiratórias da fibrose quística

AUTORES
Katrina A. Muraglia, Rajeev S. Chorghade, Bo Ram Kim, Xiao Xiao Tang, Viral S. Shah, Anthony S. Grillo, Page N. Daniels, Alexander G. Cioffi, Philip H. Karp, Lingyang Zhu, Michael J. Welsh, Martin D. Burke

RESUMO
Trabalho pioneiro de Marty Burke, da Universidade de Illinois Urbana-Champaign, para desenvolver uma nova terapêutica para a FC através da reutilização de um medicamento existente - a anfotericina B. Em colaboração com a Universidade de Iowa, os estudos no porco com FC revelaram o potencial benefício terapêutico da anfotericina B na restauração dos mecanismos de defesa imunitária dos pulmões.

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COMUNICAÇÕES SOBRE A NATUREZA

fevereiro de 2019

RNAs de transferência modificados para supressão de códons de terminação prematuros

AUTORES
John D. Lueck, Jae Seok Yoon, Alfredo Perales-Puchalt, Adam L. Mackey, Daniel T. Infield, Mark A. Behlke, Marshall R. Pope, David B. Weiner, William R. Skach, Paul B. McCray Jr., Christopher A. Ahern

RESUMO
Desenvolvimento terapêutico de ARNs de transferência (ARNt) para reconhecer mutações sem sentido causadoras de doenças - como a W1282X - no gene CFTR e permitir a síntese da proteína CFTR de comprimento total. Este projeto foi liderado por Chris Ahern e John Lueck na Universidade de Iowa e envolveu cientistas do Instituto Wistar em Filadélfia, PA, e do laboratório CFF Therapeutics em Lexington, MA. A progressão do projeto continua a ser uma prioridade da Emily's Entourage, com o financiamento de James Dhalman, da Georgia Tech, para trabalhar no fornecimento de tRNAs terapêuticos ao pulmão.

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JORNAL DA FIBROSE CÍSTICA 

maio de 2018

Terapia combinada com potenciador (co-potenciador') para a FC causada por mutantes CFTR, incluindo N1303K, que respondem mal a potenciadores individuais

AUTORES
Puay-Wah Phuan, Jung-Ho Son, Joseph-Anthony Tan, Clarabella Li, Ilaria Musante, Loma Zlock, Dennis W. Neilson, Walter E. Finkbeiner, Mark J. Kurth, Luis J. Galietta, Peter M. Haggie, Alan S. Verkman

RESUMO
Um segundo manuscrito do grupo Verkman, da Universidade da Califórnia, em São Francisco, amplia o conceito de utilização do Ivacaftor com um segundo potenciador (um co-potenciador) para elevar significativamente a atividade de uma segunda mutação rara da CFTR (N1303K). É importante salientar que este estudo também inclui a primeira demonstração de que a W1282X-CFTR pode ser activada pelo Ivacaftor e por um co-potenciador em células epiteliais nasais humanas. 

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JORNAL DA FIBROSE CÍSTICA 

janeiro de 2017

Benefício terapêutico observado com o potenciador de CFTR, ivacaftor, num doente com FC homozigótica para a mutação sem sentido W1282X CFTR

AUTORES
Venkateshwar Mutyam, Emily Falk Libby, Ning Peng, Denis Hadjiliadis, Michael Bonk, George M. Solomon, Steven M. Rowe

RESUMO
Estudo clínico realizado por Steven M. Rowe MD na Universidade do Alabama em Birmingham que demonstrou um benefício terapêutico significativo da utilização do Ivacaftor (VX-770) num indivíduo com FC homozigótica W1282X. Os benefícios clínicos - redução das exacerbações pulmonares, aumento de peso, redução da utilização de insulina - apoiam a utilização não autorizada deste medicamento para a FC em indivíduos com FC W1282X.

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O JORNAL DE QUÍMICA BIOLÓGICA

novembro de 2016

Correctores e potenciadores recuperam a função do produto de tradução do regulador da transmembrana da fibrose cística (CFTR) truncado W1282X

AUTORES

Peter M. Haggie, Puay-Wah Phuan, Joseph-Anthony Tan, Haijin Xu, Radu G. Avramescu, Doranda Perdomo, Lorna Zlock, Dennis W. Nielson, Walter E. Finkbeiner, Gergely L. Lukacs, Alas S. Verkman

RESUMO
Projeto de descoberta de medicamentos conduzido na Universidade da Califórnia, São Francisco (UCSF) por Alan Verkman, MD, PhD. O estudo identificou "correctores" e "potenciadores" potentes para a forma truncada da CFTR produzida pela mutação W1282X e validou uma abordagem terapêutica para a mutação W1282X semelhante à utilizada para delF508.

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